大祭司拉姆菲斯宣布埃塞俄比亚国王阿莫纳斯罗率军入侵尼罗河谷并逼近底比斯，伊西斯女神已选定埃及统帅。年轻的卫队长拉达梅斯独自憧憬被选中出征，以便将胜利桂冠献给心爱的阿依达（《圣洁的阿依达》）。当拉达梅斯果真被册封为主帅、全朝高呼“凯旋归来！”（Ritorna vincitor!）后，阿依达独自陷入撕裂的痛苦：拉达梅斯的凯旋意味着她父亲与同胞的毁灭。 安奈瑞斯公主设计诈出阿依达对拉达梅斯的爱意后，与法老、大祭司拉姆菲斯及万民齐聚底比斯城门，欢庆大军凯旋（《荣耀归于埃及与伊西斯！》）。在著名的“阿依达小号”辉煌齐奏中，拉达梅斯凯旋入城。当埃塞俄比亚战俘被押上时，阿依达认出了其中的父王阿莫纳斯罗并扑入他怀中。阿莫纳斯罗低声严令女儿切勿泄露他的国王身份，随后向法老谎称埃塞俄比亚国王已战死沙场，并为战俘恳求宽恕。 在与拉达梅斯大婚前夜，安奈瑞斯公主进入尼罗河畔的伊西斯神庙祈祷。阿依达蒙面来到河畔等待与拉达梅斯私会，在思乡之情中挥泪告别故国（《啊，我的祖国》）。突然，父亲阿莫纳斯罗从暗处现身，以亡母厉鬼的诅咒威逼阿依达从拉达梅斯口中套出埃及大军进军埃塞俄比亚的路线。拉达梅斯赶到后，阿依达劝他与自己私奔，并顺势询问哪条道路没有军队驻守；拉达梅斯刚脱口说出“纳帕塔峡谷”，阿莫纳斯罗便跃出高呼自己正是埃塞俄比亚国王！ 拉达梅斯拒绝了安奈瑞斯公主“只要放弃阿依达便救他性命”的条件，被大祭司拉姆菲斯判处活埋于普塔（伏尔甘）神庙祭坛之下。当致命的巨石合拢将他封入黑暗（《致命的石板在我头顶合拢》）时，拉达梅斯听见暗处传来叹息：原来阿依达得知判决后，早已悄悄潜入地宫，只为死在他怀中！当上层神庙中祭司吟诵神曲、心碎的安奈瑞斯伏在石板上哭求安宁（“Pace t'imploro”）时，地宫中的恋人平静地向人间作最后诀别（《永别了，人间；永别了，泪水之谷》）。